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經(jīng)營范圍：國家標準物質、進口標準品、冶金標樣、標準氣體、藥典對照品、標準菌種、實驗室耗材、試劑盒

產(chǎn)品信息：EHS細胞-臨床醫(yī)學

標準名稱：EHS細胞-臨床醫(yī)學

產(chǎn)品簡介：

<1>細胞培養(yǎng)

• 細胞請于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，大部分細胞是37℃，5% CO2，濕度100%環(huán)境下培養(yǎng)的。有極少部分細胞培養(yǎng)條件不*，請仔細閱讀相應的細胞說明書，使用正確的培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件；
• 細胞于培養(yǎng)瓶或皿中培養(yǎng)，加入適量說明書上標注的細胞相應*培養(yǎng)基（一般液面高度2-3mm即可）。

<2>細胞傳代（以下步驟適用于10cm皿）

• 細胞培養(yǎng)至密度達80%以上時即可傳代，先將細胞培養(yǎng)基取出3mL用15mL離心管裝好，其他培養(yǎng)基全部吸干舍棄；
• 培養(yǎng)皿加入2-3mL無菌PBS，輕輕晃動皿，使PBS浸洗到皿底所有部位，PBS吸干舍棄；
• 加入1mL胰酶，輕輕晃動皿，使胰酶浸沒到皿底所有部位，將皿蓋好放入培養(yǎng)箱中消化；

3min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞不再貼壁，即可加入*步收集的培養(yǎng)基混勻；

• 若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至不貼壁為止；
• 將細胞懸液均勻分成幾份，分別加入不同培養(yǎng)皿中，補加新培養(yǎng)基后放回培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

<3>相關問題

• 部分細胞在傳代后時，會有以下現(xiàn)象：細胞內(nèi)會有黑色小點、細胞間隙有些顆粒物、培養(yǎng)基漂浮一些死細胞或者細胞長的極慢。出現(xiàn)以上現(xiàn)象時，可以咨詢本公司技術人員此現(xiàn)象是否正常及相關處理方式，不要頻繁換液，大多數(shù)細胞1周換液2-3次即可。
• 細胞碎片較多、背景較臟時，貼壁細胞用PBS漂洗兩次、懸浮細胞打散后低速離心（900rpm，3min）能有效改善。
• 傳代比例建議1:2-1:3，長得比較快的細胞可以1：3，比較慢的按1:2傳代。傳代后，建議不要使用傳代前培養(yǎng)所使用的培養(yǎng)基，會有大量細胞碎片甚至導致細胞死亡的風險。
• 細胞狀態(tài)不好或者生長極慢的時候，可以通過增加血清濃度調整細胞狀態(tài)及生長速度。
• 請不要隨意更換培養(yǎng)基，因實驗需要，可以逐步馴化。

懸浮傳代：混勻細胞，收集細胞懸液900-1000rpm離心3min，棄上清。再加5ml PBS重懸細胞，再離心后，用*培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)皿。第二次PBS重懸是為了去除碎片，如果平時碎片比較少，傳代時可以省略PBS重懸的步驟；如果碎片很多，建議PBS多洗一次。

• 細胞凍存

<1>凍存操作

• 凍存液配方：建議使用92%FBS+8%DMSO，客戶自身實驗室所使用的凍存液也可以適用，血清濃度不低于30%，DMSO含量不高于12%即可。
• 收集細胞按照以上細胞傳代步驟操作至第④步后，將細胞懸液收集入15mL離心管，離心（1200rpm，3min）；
• 棄上清，加入配制好的凍存液，重懸細胞，懸液加入無菌凍存管中；
• 將凍存管在4℃靜置10min，后將之正置于室溫下的厚壁有蓋泡沫盒中，蓋緊盒蓋，放入-80℃冰箱過夜，第二天放入液氮即可長期保存。

<2>相關問題

• 10cm皿的細胞長滿一般可以凍存2-3管，部分細胞長的比較慢，凍存的細胞密度要稍微大點，以防止復蘇后生長困難。
• 凍存液中含的DMSO請使用細胞級DMSO，同時濃度不要太高。部分細胞在10%DMSO條件下凍存會死亡，所以DMSO濃度5%-8%是比較推薦的濃度。
• 細胞凍存及復蘇遵循慢凍快融的原則，即凍存時溫度不能急劇下降，應控制溫度緩慢下降。復蘇時應快速融化，融化后盡快加入培養(yǎng)基中。
• 凍存時建議設置凍存檢測，即取0.2-0.3mL的凍存液重懸的細胞于一個凍存管中，與正常體積凍存的細胞共同凍存，至液氮后復蘇檢查凍存結果。凍檢合格前，留一部分細胞繼續(xù)培養(yǎng)，以防萬一。

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公司簡介：

中國標準物質網(wǎng)隸屬于北京普天同創(chuàng)生物科技有限公司，是國內(nèi)最早的專業(yè)化標準物質信息平臺。創(chuàng)建以來，一直專注于標準物質的推廣與銷售，是多家知名標準物質研制單位和分析儀器公司的代理商，代理銷售國內(nèi)外數(shù)萬種標準物質和標準樣品，同時經(jīng)營各類精細化工產(chǎn)品及計量設備，業(yè)務遍及國內(nèi)外眾多檢測機構、科研院校和工廠企業(yè)，在業(yè)界具有較強的影響力。